DNA甲基化和羟甲基化是基因表达调控的重要表观遗传修饰。DNA甲基化通常抑制基因转录。相反,羟甲基化,激活基因表达或提示DNA去甲基化。
通过一组酶转化5-羟甲基胞嘧啶(5HMC)从5-甲基胞嘧啶(5MC)转化为10-11级易位(TET)家族二恶英酶。研究DNA甲基化的金标准伯硫酸氢盐转化技术不区分5mc和5hmc。然而,映射5HMC Genomewide的新方法迅速提出,尽管目前尚不清楚不同的方法在准确地调用5HMC时如何进行比较。
CD基因组学可提供两个5HMC基因组的检测方法:
1.全基因组亚硫酸氢盐/氧化亚硫酸氢盐测序(欧宝体育官网网址WGBS./oxbs-seq.的)
2.基于抗体的免疫沉淀和羟甲基化DNA的测序(HMEDIP-SEQ)。欧宝体育官网网址
引入HMEDIP-SEQ
虽然尚不确定5-HMC的精确功能,但已经假设它可以代表去甲基化DNA的途径,因为5-羟甲基胞嘧啶被修复为错配的DNA并用未甲基化的胞嘧啶代替。羟甲基甲基化对于调节胚胎发育,干细胞多能性,基因组印记,X-染色体灭活和精子发生是必要的。DNA的异常羟甲基甲基化通常导致各种疾病,例如癌症和男性不孕症。此外,这些异常的DNA修饰可以通过配子的后代继承,并且疾病这些修改原因也可以传递给后代。
羟甲基化的DNA免疫沉淀(HMEDIP)是一种免疫抑制技术,其中使用5-羟甲基胞苷抗体识别含有5-HMC的DNA片段,并且可以有效地富含羟甲基的DNA片段在基因组范围内的测定中。这种选择性是分析DNA甲基化的最常见方法的重要方法,例如酶方法和亚硫酸氢盐转化,不能区分5-HMC和5-MC。
本发明羟甲基化DNA片段的图书馆施工,高通量测序和生物信息分析可以在特定的生欧宝体育官网网址理或病理条件下为我们提供基因组型羟甲基的图。
项目工作流程
基因组DNA超声处理以产生DNA片段,尺寸选择300至500bp片段。在HMEDIP之前,Illumina条形码适配器被连接。将约4mg衔接连接的GDNA合并在一个管中。IP缓冲液用于变性并稀释混合DNA。将变性DNA与抗5MC抗体一起温育。抗体-DNA复合物被珠子捕获并纯化,并使用衔接物特异性引物扩增羟甲基甲基化片段,并根据制造商的协议在Illumina平台上进行蛋白质生成和测序。欧宝体育官网网址
图书馆的构造如下所示:
服务规格
样本要求
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欧宝体育官网网址测序策略
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生物信息学分析 我们提供定制的生物信息学分析,包括:
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参考:
[1]丁P,广州G,延庆G,等。维生素C增加5-羟甲基胞嘧啶水平,抑制膀胱癌的生长[J]。临床表观遗传学,2018,10(1):94。
[2]李G,Qian H.使用HMEDIP-SEQ揭示的rRNA基因的rRNA基因的Hypo-羟甲基甲基化[J]。科学报告,2017,7(1):11237。