为了支持最近循环RNA(Circrna)研究的出现,CD基因组学提供了Circrna测序服务,其利用最新的Illumina平台进行快速,经济,精确的表征。欧宝体育官网网址
Circrna测序的引入欧宝体育官网网址
Circrna是非编码RNA(NCRNA)的新构成,由外显子,内含子或两者的非顺序后涂层产生。它们的特征在于共价闭环特征,从而缺少5'端盖和3'多尾。由于其核酸酶抗性特性,Circrnas是高度稳定的NCRNA形式。当在20世纪70年代首次确定时,Circrnas被视为病毒基因组或错误剪接事件的副产物。但最近的研究表明,Circrnas在植物,动物和人类中都有节水,并且Circrnas具有重要的生物学功能。
Circrnas可以充当miRNA海绵并符合基因表达中的调节功能。值得注意的是,在特定的疾病环境中异常表达各种Circrnas,这表明它们与人类疾病的发生和发展的关联。CircRNA还在蜂窝方法中进行多种功能,包括用于翻译的模板,调节替代剪接和基因表达,用于组装蛋白质复合物的支架,以及RRNA和TRNA生物的调节剂。另外,由于它们在免疫调节和病毒感染的干预,它们可用于提高抗病毒治疗目的的免疫激活。
从高吞吐量转录组数据综合检测CircRNA是研究其生物发生和功能的初始和关键步骤。rRNA /线性RNA耗尽的RNA与计算欧宝体育官网网址工具的高通量测序与计算工具相结合的RNA在多种生物体中以定量方式识别成千上万的新系列和分析它们的线性宿主转录物。与MiRNA和其他小RNA不同,CircrNA不能通过大小或电泳迁移率与其他RNA种类不易分离。因此,它们通常保留在RRNA耗尽的文库中,并富含用RNase R处理的文库中,该文库仅消化线性RNA。
CircrNA测序的优点欧宝体育官网网址
- 识别已知和新的Circrnas
- 允许跨越宽动态范围的Circrna分析
- 探索新型生物标志物和Circrnas监管网络
Circrna测欧宝体育官网网址序工作流程
Circrna测序的一般工作流程如下概述。欧宝体育官网网址为了构建Circrna测序文库,第一步是耗欧宝体育官网网址尽RRNA,然后是线性RNA消化和链孢杆菌的文库制剂。我们经验丰富的专家团队执行质量管理,以确保有信心和无偏见的结果。
服务规范
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样品要求和准备
- 样品类型:总RNA没有降解或DNA污染
- 建议总RNA≥5μg
- 样品浓度≥100ng/μl
- 样品纯度:OD260 / 280 = 1.8〜2.2
- 所有RNA样品都验证了纯度和数量
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- 股线特异性文库制备
- Illumina Hiseq PE150
- 超过80%的基地,≥Q30质量分数
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生物信息学分析 我们提供定制的生物信息学分析,包括:
- 原始数据质量控制
- 基于参考的映射
- Circrna鉴定和注释
- 已知和新的Circrna表达分析
- 差异表达分析,富集分析和功能分析
- CircrNA的原点分析,包括目标miRNA预测和Circrna-miRNA互动网络分析
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分析管道
我们经验丰富的科学家和先进技术支持,CD基因组学可帮助您一次通过严格的质量控制和高级生物信息学分析一次通过高通量测序获取具有单基分辨率的Circrna序列信息。欧宝体育官网网址如果您有其他要求或问题,请随时与我们联系。
参考:
王米,yu f,wu w,等。圆形RNA:一种新型的非编码RNA和它们对抗病毒免疫的潜在影响。国际生物科学杂志,2017,13(12):1497。
1. Circrna如何产生?
通常通过以非顺序顺序的外显子剪接产生Circrna。RNA的圆形化可以通过重复序列产生,以促进非顺序外显子的背部剪接。
图1. Circrna生物发生(Fischer&Leung 2016)。
2.为什么使用高吞吐量技术在微阵列上分析Circrnas?
高通量测序是DNA微阵列具有许多欧宝体育官网网址优点的时间和成本节省方法。
一世。检测新的转录物。微阵列取决于与物种或转录物特异性探针的杂交限制为已知的Circrnas。然而,RNA测序可以检测新欧宝体育官网网址的转录物,基因融合,单核苷酸变体,小插入和缺失,以及其他先前未知的变化。
II。更广泛的动态范围。微阵列受到高端的背景下的背景,高端信号饱和度,而RNA测序可以量化离散的数字测序读数,提供更广泛的动态范围。欧宝体育官网网址
III。增加敏感性和特异性。与微阵列相比,RNA测序提供了提高的敏感性和特异性,使得能欧宝体育官网网址够增强基因,转录物和差异表达的检测。
IV。检测低丰度和罕见的转录物。欧宝体育官网网址对于检测稀有转录物,每种细胞单次转录物或弱表达基因,可以容易地增加测序覆盖深度。
3.是否有用于构建CircrNA的Circrna表达载体的提示?
是的。需要激活循环化的循环化和序列的序列来构建携带CircrNA的CircRNA表达载体。
参考:
Fischer J W,Leung A K L. Circrnas:细胞应激的调节器。生物化学和分子生物学的关键评论,2017,52(2):220-233。
Circhla-C通过海绵MiR-150在狼疮肾炎中起重要作用
杂志:分子治疗:核酸
影响因素:6.392
发布时间:2017年8月7日
抽象的
圆形RNA通过作为miRNA海绵作用来参与多种疾病的发病机制。先前的研究报道,miR-150与狼疮肾炎(LN)患者的肾脏慢性指数正相关。作者进一步调查了LN患者中肝硬化和MIR-150之间的肾心圈谱分析和相互作用。生物信息学分析预测,MiR-150由Circhla-C调节,并且Circhla-c通过冲水-150通过冲水机构在Ln的发病机制中发挥着重要作用。
材料与方法
结果
1. LN患者肾活检中Circrnas的分析和特征
鉴定了总数为18505年CircrNA转录物,包括11411个上调和7094个下调的Circrnas。分层聚类热线图显示CircrNAS表达水平在LN肾活量和正常对照肾之间聚集。发现171芯卷中的CircrNA在LN组和正常对照组之间显着表达。
图1. Circrnas的分析和特征。(a)聚类热图。红色代表上调Circrnas,绿色代表下调的Circrna。(b)火山图。(C-F)差异表达Circrnas的特征。
2. Circrnas / miRNAS交互网络
通过保守的种子匹配序列预测Circrnas / miRNAS交互网络。据透露,所有40个Circrnas都包含了各自的miRNA响应元素(MRE)。由40个Circrnas中的每一个调节的前五个miRNA被显示为网络(图2)。
图2. Circrnas和MiRNA之间的交互网络。
3.预测功能和途径
通过对Go和Kegg的分析预测了差异表达的Circrna的功能。富集分析显示,靶宿主基因的功能作用与生物过程,细胞组分和分子官能结合。Kegg分析发现,与142个上调CircrNA的功能相关的23个途径,缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路和神经营养素信号途径都参与调节NF-KB的表达。
图3. LP中过表达Circrnas的预测功能。
4. Circhla-C和miR-150之间的相互作用
Circhla-c与LN疾病活动的参数正相关。MiR-150表现出与Circhla-C负相关的趋势(图4)。
图4.肾小写与LN中的肾Circhla-c和miR-150之间的相互作用。
参考:
栾j,jiao c,kong w,等。Circhla-c通过海绵MiR-150在狼疮肾炎中起重要作用。分子治疗 - 核酸,2018,10:245-253。