数字RNA测序（UMI-欧宝体育官网网址RNA-SEQ）

数字RNA测序的引入欧宝体育官网网址

RNA测欧宝体育官网网址序（RNA-SEQ）是通过利用下一代测序（NGS）技术来映射和定量转录om的首选工具。转录组是指细胞中的一组完整的转录物，其提供关于特异性发育阶段或生理状况的转录物水平的信息。由于PCR扩增的偏差，不同的cDNA片段不均匀扩增。在测序过程中，易于扩增的片段大大富集，并且一些具有严重碱基偏差的低含量片段或片段甚至完全丢失，这最终影响测序结果的准确性。欧宝体育官网网址这只允许我们了解基因表达的一般趋势，但不能满足原始基因表达水平的绝对量化。

通过UMI（独特的分子标识符），我们在图书馆构建之前标记每种分子，使得每个分子由独特的顺序组成。理想地，然后可以通过其独特的UMI序列和模板序列来识别每个模板分子。在PCR扩增后，可以从数据集中鉴定并消除PCR拷贝，因此在PCR期间产生的不均匀扩增和伪像可以几乎完全消除。通过UMI定量统计数据，结果自然更准确。UMI将NGS组合以在特定的时效状态下研究某些物种和组织的基因表达信息，并以序列和量化实现高精度。

这对于诊断尤其重要，以及暗示少量起始材料。强烈推荐用于分析含有许多类似序列的核苷酸群体，例如小RNA，芯片-SEQ标签，适体，RAD-SEQ标签或GBS标签。

主要特点和优点

• 低启动量：100ng可以达到相同的1ug样品的测序结果，这更适合稀有和珍贵的样品;欧宝体育官网网址
• UMI技术：将UMI添加到每个cDNA片段中，除去PCR扩增偏压，真正反映了转录物表达的丰度，并达到准确和无偏的量化;
• 改善转录组测序质量：准确地分析表达水平和筛网欧宝体育官网网址差异表达，以及精确地锁定RNA编辑，替代剪接和SNP位点;
• 适用于多个RNA-SEQ。

项目工作流程

数字RNA测序，也称为数欧宝体育官网网址字RNA-SEQ或UMI-RNA-SEQ，是绝对的定量转录组测序技术，在文库扩增之前向每个cDNA片段添加独特的分子标识符（UMI）。UMI将伴随片段扩增，测序和分析的整个过程。欧宝体育官网网址测序后，使用欧宝体育官网网址UMI追踪每个片段的源，并将来自相同源（具有相同序列和UMI）的片段组合，以精确地去除PCR扩增重复术并在放大之前精确地恢复样品的原始状态。在该过程中，也可以校正PCR扩增和测序中的误差。欧宝体育官网网址

图1.转录组测序（左）和UMI-RNA-SEQ（欧宝体育官网网址右）

	样本要求 新鲜动物组织干重：≥30mg 新鲜植物组织干重：≥100毫克 细胞数：≥2×105.细胞 全血：≥1毫升 总RNA量≥1μg，浓度≥50ng/μl
	欧宝体育官网网址测序策略 Illumina PE150 6g / /每个样品

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