NGS-BSP.

NGS-BSP的引入

DNA甲基化强烈影响染色质结构和基因表达的调节。多年来，Bisulfite测序PCR（BSP）用作测欧宝体育官网网址量特定区域DNA甲基化的“金标准”。BSP具有高可靠性和准确性，可以准确地确定片段中每个CPG位点的甲基化状态。下一代基于测序的亚硫酸氢盐测序PCR（N欧宝体育官网网址GS-BSP）可以找到更精确的甲基化修饰信息，并且适用于已知甲基化检测区域的一些基因，并且还适用于探索基因的显着甲基化区域。

用亚硫酸氢盐处理DNA将胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，但留下5-甲基胞嘧啶残留物不受影响。设计了BSP引物，用于PCR扩增靶区域。纯化PCR产物后，构建了PCR文库，然后进行下一代测序。欧宝体育官网网址最后，测序读取可用于映射原欧宝体育官网网址始序列，计算甲基化位点和数量，分析甲基化水平。

主要特点和优点

• 快速检测所有甲基化位点
• 高吞吐量，高精度，简单直观的结果
• 如果测试大量样品，则比原始BSP更具成本效益和节省时间

项目工作流程

简而言之，使用在线Methimer软件设计BSP引物。使用Zymo EZ DNA甲基化 - 金试剂盒（Zymo）转化基因组DNA（1ug），并将第二十分洗脱产物用作PCR扩增粘合剂的模板。对于每个样品，产生多种基因的BSP产物，同样地汇集并进行适配器连接。使用配对端150bp策略在Illumina Hiseq平台上测序来自所有样品的条形码图书馆。

	样本要求 GDNA量：≥1μg; DNA浓度≥30ng/μl
	欧宝体育官网网址测序策略 Illumina Hiseq，PE150。 覆盖深度≥100x。

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参考
Pan X，Gong D，Nguyen DN，等。早期的微生物定子会影响与早产猪的肠道免疫和代谢相关的基因的DNA甲基化[J]。DNA研究，2018年。

张某，沉l，夏y，等。肥胖沉积物的DNA甲基化景观肥胖和瘦猪的脂肪酸组成[J]。科学报告，2016,6：35063。