切割标签测序的引入欧宝体育官网网址
大规模平行测序的出现和每碱度成本的急剧降低促进了基因组学革命，然而欧宝体育官网网址，由于用于将染色质片段的暗氮素碎片映射到基因组的方法的局限性，表述概况的充分承诺已经滞后。染色质免疫沉淀具有测序（CHIP-SEQ）一直是研究组蛋白修饰和转录因欧宝体育官网网址子对基因组的结合位置的有效技术方法。然而，由于交联引起的芯片SEQ具有低信号，高背景和表位掩蔽，并且低产量需要大量的细胞。目前，芯片的替代方案包括用于未固定细胞的酶 - 系束性方法，例如DaMid，Chec-SEQ，切割和运行（使用核酸酶的靶向下的裂解），其中特定的目的蛋白质以原位靶向，然后在基因组中进行靶向缩放和切割和标签。
切割和标签是目标和标签下切割的缩写，是研究人员用于研究蛋白质和DNA之间的相互作用，并鉴定其感兴趣的蛋白质的DNA结合位点的分子生物学方法。
在切割和标签中，染色质蛋白质通过特异性抗体原位地与蛋白质A-TN5转座酶融合蛋白合并。转座酶的激活导致染色质的切割靠近蛋白质结合位点，并同时加入NGS衔接子序列，并有效地产生具有高分辨率和异常低的背景的片段文库。从Live Cellow到序列式库的所有步骤都可以在台式上欧宝体育官网网址的单个管中或在高吞吐量管道中的微孔中执行，并且整个过程可以在一天内执行。
剪辑和标签方法非常敏感，据报道，据报道，对于一些组蛋白修改，据据报道，少于60个细胞。随着芯片，松动随机剪切染色质，抗体免疫沉淀的DNA具有不同的长度，通常是几百个碱基对。然而，通过切割和标签，转座酶仅在近距离接近蛋白质结合位点切割染色质，导致更短的DNA被测序。这允许更低的测序深度（3-500万读欧宝体育官网网址数）产生强大的数据，而不是大多数芯片SEQ测定的背景信号。最后，因为切割和标签协议使用完整的细胞作为起始材料，而不是超声化的染色质，所以它可以适应单细胞实验（SCCUT和标签）。
主要特点和优点
Cut＆Tag是一种用于研究蛋白质-DNA相互作用的新分子生物学方法，并提供对芯片SEQ和切割和运行的一些优点：
1.切＆标签与低电平指数兼容
在描述切割和标签方法的第一个出版物中，低至60个细胞足以分析整个基因组的H3K27ME3曲线。
2.切割和标签不需要固定或超声处理
切割和标签是对本地（未固定的）细胞或核进行的，避免了标准芯片工作流的固定，染色质制备和超声处理步骤。
3.切和标签快速
4.切割和标签需欧宝体育官网网址要更少的测序
切割和标签隔离的较短的DNA序列意味着它没有与芯片SEQ相同的深度测序要求。欧宝体育官网网址3-5百万读取足以在切割和标签协议之后产生强大的数据，比芯片SEQ更小的测序约为10倍。欧宝体育官网网址
5.切割和标签也更容易适应单细胞分析。
项目工作流程
CUT＆TAG协议由3个主要步骤组成：
图1是用于切割和标签染色质谱的原位束缚。一种。切割和标签的步骤。添加的抗体（绿色）与基因组中核肉（灰色椭圆形）之间的靶染色质蛋白（蓝色）结合，并将过量洗掉。加入第二抗体（橙色）并增强在抗体结合位点的PA-TN5转座体（灰色盒）的束缚。洗掉过量的转座体后，加入Mg ++激活转塔，并在染色蛋白蛋白结合位点聚合适应剂（红色）。在DNA纯化在两端的适配器纯化基因组片段，通过PCR富集。湾切割和标签是在坚固的支持下进行的。未固化的细胞或核（蓝色）透透透析并与靶染色质蛋白的抗体混合。在加法和结合细胞到胰岛素酰基酰胺磁珠（M）之后，所有进一步的步骤在与洗涤和孵育之间的磁性捕获相同的反应管中进行，包括PA-TN5束缚，集成和DNA净化
服务规格
 |
样本要求
|
 |
欧宝体育官网网址测序策略
|
 |
数据分析
|
在CD基因组学中，我们为您的剪辑和标签项目提供了高质量的测序和全面的生物信息学分析，可以精确筛选，欧宝体育官网网址并确定整个基因组中组蛋白修饰和转录因子的结合位置。如果您有其他要求或问题，请随时与我们联系。
参考：
报价请求
