CRISPR筛选和测序:简介，工作流程和应欧宝体育官网网址用欧宝官网app苹果下载

在噬菌体的竞争中，细菌和古痤疮已经进化了独特的捍卫方式，包括CRISPR / CAS系统，细菌和古痤疮的免疫系统来抵抗外国DNA或RNA的侵袭，识别外来入侵核酸，并切割它们免疫防御。

目前，CRISPR / CAS系统已成为高效，方便的研究工具，以广泛应用于基因工程领域。例如，在CRISPR / CAS9诱导的基因编辑过程中，Cas9酶特异性地将双链DNA与SGRNA（小导向RNA）的引导粘合。并且该细胞通过非同源末端接头（NHEJ）或同源性定向修复（HDR）来实现靶基因编辑。

同时，CRISPR/Cas系统可以很容易地扩大用于全基因组筛选。CRISPR筛选是一种大规模的遗传丧失功能筛网方法，产生和筛查突变细胞群以促进特定细胞类型中的关键基因或遗传序列的发现。CRISPR筛选的基本思想是敲出基因组中的每个基因，这可能是每个细胞的重要性且只有一种基因。

全基因组CRISPR/Cas9敲除筛选和测序的工作流程欧宝体育官网网址

1.sgRNA文库构建:通过计算设计、合成、PCR扩增、克隆到载体传递系统中。

2.筛选：将SGRNA，CAS9和其他必要的组件库引入细胞。然后选择所需的克隆并提取DNA。

3.欧宝体育官网网址测序:PCR和下一代测序。

4.测量和分析：鉴定，分析了SGRNA，分析和相关基因。

欧宝官网app苹果下载CRISPR筛选和测序的应用欧宝体育官网网址

来识别疾病相关基因CRISPR/Cas9全基因组筛查可用于疾病相关基因的鉴定，这对发现新的药物靶点和提供治疗策略具有重要意义。例如，CRISPR/Cas9筛选技术是癌症治疗的福音，可以获得和分析靶基因，发现与肿瘤细胞生存能力相关性较高的基因。通过抑制这些基因的表达，可以阻断肿瘤细胞的周期，诱导细胞凋亡，而对正常血细胞的影响则较小。CRISPR/Cas9筛选还可以用于研究转移相关基因，探索病毒如何入侵和损伤宿主细胞等等。

研究非编码序列：非编码DNA序列，组合约98％的人类基因组序列，包括非编码RNA，顺式和反式调节元件，内含子，假生素，端粒，重复序列等。研究表明，非编码序列在基因表达，肿瘤发生，免疫调节，血液发生和许多其他生物学过程的调节中起着枢转作用。可以应用基因组 - 宽的CRISPR筛选来研究未知的非编码DNA序列，对于了解基因调控，疾病和生物进化具有重要意义。

学习监管网络CRISPR/Cas9全基因组筛选已广泛应用于细胞生物学的各个领域。然而，表型的筛选主要在细胞增殖、生存能力、耐药、报告基因表达等方面进行。细胞内更复杂的生物调控网络(如转录组、基因相互作用)需要进一步研究。将CRISPR/Cas9基因组筛选技术与单细胞测序相结合，可以准确捕捉sgRNA的表达，并可以测量细胞中基因转录水平的变化。欧宝体育官网网址同时，可以根据计算模型对大量数据进行分析，描述复杂的基因网络。