HLA分型:介绍、方法和应用欧宝官网app苹果下载

人类白细胞抗原分型简介

人类主要组织相容性复合体(MHC)蛋白由HLA(人类白细胞抗原)系统编码。人体免疫系统是由细胞膜上的糖蛋白控制的。MHC分为两类:MHC I类和MHC II类。在6p21染色体的3.6 Mb区域发现了HLA基因复合物。迄今已鉴定出超过10,000种不同的HLA等位基因，它们是人类基因组中最具多态性的基因家族。移植排斥反应、自身免疫性疾病、疫苗药物基因组学、癌症、感染性疾病和配偶选择都与HLA基因有关。

HLA基因分型是确定一个人HLA I类和II类基因多态性的过程，这是移植匹配和疾病相关性研究所需要的。由于不同基因组区域的高多态性，明确的HLA基因分型在技术上具有挑战性。下一代测序(NGS)的引入改变了基因分型的格局。欧宝体育官网网址传统的HLA基因分型和Sanger测序有局限性，而利用PCR和NGS的高分辨欧宝体育官网网址率HLA基因分型能够明确地识别患者的这些局限性。它允许可靠、简单、高质量和高通量的关键HLA基因分析，数据分阶段至少六位数。另一个好处是，因为DNA框架是由单个分子组成的，因此相位问题得到了解决。

HLA抗体的检测及其应用欧宝官网app苹果下载

大约20%的经产妇女和30%到50%的多次输血患者中发现了HLA抗体。传统的血清学细胞毒性法、流式细胞术和固相法是检测HLA抗体的三种主要方法。

血清学细胞毒性的方法

磁珠用于从血液或脾脏分离B淋巴细胞，用于HLA II类分型。HLA I类分型可以用剩余的白细胞来完成。然后将淋巴细胞放在Terasaki板上的单个孔中，这些板由各种特定的抗体组成。如果特异性抗体和HLA抗原附着，井中的细胞就会死亡。这种方法不能区分HLA和非HLA细胞毒性抗体。

流式细胞术

本实验将新鲜有核白细胞与荧光标记的单克隆抗体混合。与抗体结合的表面HLA抗原发出荧光，当它们通过激光束时，流式细胞仪可以检测到它们。

固相法

将涂有特定HLA抗原的氟色聚苯乙烯珠与患者血清培养后，使用pe标记的fc特异性抗体进行反应。虽然这项技术比血清学细胞毒性和ELISA更精细，但增加敏感性的治疗效果还有待确定。

HLA多态性检测及其工作流程

自聚合酶链反应(PCR)的发展以来，基于dna的方法由于其准确性和重现性以及更高的灵敏度和分辨率而在分型实验室占据主导地位。PCR-sequence-specific primer (SSP)、PCR-sequence-specific oligonucotide (SSO)、Real-time PCR、sequen欧宝体育官网网址cing -based Typing (SBT)、next-generation sequencing (NGS)都是基于dna的方法。

NGS也被称为高通量测序，由于其准确性、高通量和高速度，正逐渐成为HLA分型的首选方法。欧宝体育官网网址总会在最重要的好处是,它消除了歧义在成本与SBT,而不需要额外的检查DNA库准备,目标扩增HLA肽的基因代码使用乳液或固相聚合酶链反应,DNA sequencing-based打字,和对基因序列比对银行数据库,欧宝体育官网网址例如国际免疫遗传学项目/人类白细胞抗原(IMGT/HLA)数据库，都是NGS过程的一部分。基于高通量测序的HLA分型是临床诊断、治疗和个性化医疗中常用的方法。欧宝体育官网网址

引用:

1. Duke JL, Lind C, Mackiewicz K，等．为临床应用确定基于NGS的HLA分型方法的性能特征。欧宝官网app苹果下载Hla．2016、87(3)。
2. 新一代HLA位点测序:方法及其对HLA分型、人群遗传学和疾病相关性的影响。ob体育娱乐欧宝体育官网网址人类免疫学．2016年,77(11)。
3. C, Fürst D, Faé I，等．通过下一代测序进行HLA分型——越来越接近现实。欧宝体育官网网址组织抗原．2014、83(2)。