核糖体分析简介
核糖体 - 分析技术是响应于在平移水平上测量基因表达的重要性而产生的。核糖体谱是一种用于确定核糖体读取的精确mRNA区域的直接技术，并直接检查与翻译机械相关的转录物。核糖体分析是蛋白质产生的细胞快照，具有潜力，可以告知几乎每个生物和临床研究领域。与常规RNA-SEQ研究相比，产生核糖体分析以评估在非活动翻译中的mRNA。
它创建了一个翻译，它是所有核糖体的“全局快照”，所有核糖体都在给定时间积极翻译在细胞中。研究人员现在可以评估翻译开始网站的位置，细胞或组织中翻译ORF的补充，核糖体在信使RNA上的分配，以及核糖体作为这些发现结果转化的速率。与RNA-SEQ不同，序列在样品中的给定序列的所有mRNA，核糖体分析只看着在翻译过程中通过核糖体固定的mRNA序列。PolySome分析与这种技术不同。
图1.使用核糖体 - 分析数据识别翻译ORF。（香港，2016）
核糖体分析原则
平移核糖体可以保护来自RNase消化的mRNA片段的约30个核苷酸的现实允许核糖体分析。在该技术中首先使用传统的核糖体脚印分子方法。在该方法中，核酸酶用于破坏体外翻译MRNA的未受保护区域。可以将核糖体保护的MRNA绘制回初始mRNA以评估平移核糖体的精确位置。通过绘制和评估核糖体足迹的整个补充来评估全球的新蛋白质合成和注释编码区域来增强核糖体剖面性。由于测序技术的进步，MRNA-SEQ允许对所有翻译核糖体进行详细和准确的分析。欧宝体育官网网址
核糖体分析工作流程
可以通过在使用核酸酶消化期间评估保护的30个核苷酸来分离核酸酶抗性核糖体来精确地获得翻译的消息。核糖体分析的程序如下：
1.通过裂解细胞或组织分离与核糖体结合的mRNA分子。
2.使复合物免疫。这通常用环己酰亚胺完成，但也可以用其他化学品完成。具有翻译无关的裂解条件，也可以避免使用平移抑制剂。
3.消化用核糖核酸释放物未受核糖体保护的RNA。
4.使用蔗糖梯度密度离心或专用色谱柱分离mRNA-核糖体复合物。
5.用苯酚/氯仿纯化混合物以消除蛋白质。
6.用于先前受保护的mRNA片段的大小选择。
7. Liate 3'片段适配器
8.已识别的减去RRNA污染物（可选）。
9.逆转录酶用于将RNA转化为cDNA。
10.以逐链的方式扩增。
11.从序列中读取。
12.确定平移简档，将序列结果对齐至基因组序列。
欧宝官网app苹果下载核糖体分析的应用
核糖体分析的三个主要用途是分类平移的mRNA区域，观察如何折叠肽掺杂，并测量合成的特定蛋白质的体积。其他用途包括（1）定义复合体转录组内的翻译序列，（3）映射翻译引发区域，（4）测量mRNA翻译水平的差异基因表达，以及（5）鉴定新的蛋白质编码基因和核糖体暂停，（6）提供定量RNA测序的数据。欧宝体育官网网址
参考
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- Ingolia nt。在整个基因组中翻译的核糖体占地面积。细胞。2016年3月24日; 165（1）。
- Hsu py，calviello l，wu hy，等。超级分辨率核糖体分析揭示了拟南芥中的未经发改的翻译事件。国家科学院的诉讼程序。2016年11月8日; 113（45）。
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